中國熱科院在高濃度瓊脂糖凝膠制備及應用方面取得新進展

　　近日，中國熱科院生物所蛋白質(zhì)組學研究團隊在高濃度瓊脂糖凝膠制備及應用方面取得新進展，開發(fā)出一種分離低分子量核酸和蛋白質(zhì)的高濃度瓊脂糖凝膠制備和電泳方法。通過該方法可制備濃度高達14%的瓊脂糖凝膠，分離相差2-bp或2-nt的DNA片段和實現(xiàn)植物復雜蛋白質(zhì)的高分辨率分離。

 

　　核酸和蛋白質(zhì)的凝膠分離一直是分子生物學研究的重要組成，但低/中濃度瓊脂糖凝膠電泳對于低分子量核酸和蛋白質(zhì)的分離達不到聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）的高分辨率。針對這一難題，本研究團隊利用高溫高壓制備了充分溶解的高濃度瓊脂糖凝膠（HAG），發(fā)明了一種簡單易操作的灌膠塑料盒灌制黏稠的HAG垂直凝膠，并改進了適合小分子量核酸和蛋白高濃度瓊脂糖電泳（HAGE）的緩沖液條件，可有效分離在10-100 bp范圍內(nèi)相差2-bp或2-nt的DNA片段，在10-200 kDa范圍內(nèi)實現(xiàn)植物復雜蛋白質(zhì)的高分辨率分離。HAGE不僅達到了媲美PAGE的小分子量核酸蛋白分離效果，而且制備過程中也不涉及危險化學試劑；更為關鍵的是HAGE可以應用于一些PAGE較難應用的研究，如In-Gel Western blot和蛋白凝膠回收。該方法的建立為植物蛋白質(zhì)分離鑒定等研究提供了技術(shù)支撐。

 

　　該研究成果以“A method for high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids and proteins”為題發(fā)表于《International Journal of Biological Macromolecules》。中國熱科院生物所副研究員常麗麗為論文第一作者，中國熱科院生物所副研究員仝征、?？趯嶒炚狙芯繂T徐兵強為論文通訊作者。該研究得到了國家重點研發(fā)計劃、海南省自然科學基金、中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院基本科研業(yè)務費等項目資助。

 

　　該團隊自組建以來，已構(gòu)建穩(wěn)定的熱帶作物蛋白質(zhì)組學技術(shù)體系，并利用比較蛋白質(zhì)組學、磷酸化蛋白質(zhì)組學、高通量蛋白質(zhì)組學等技術(shù)重點圍繞天然橡膠生物合成、木薯塊根淀粉積累、香蕉枯萎病致病機理等開展研究，獲得較好的研究進展，已發(fā)表學術(shù)論文49篇，其中在《Molecular & Cellular Proteomics》《Journal of Proteome Research》等期刊發(fā)表SCI論文30篇；獲授權(quán)國家發(fā)明專利6件，海南省科技進步二等獎1項。

 

　　論文鏈接（點擊閱讀原文查看）：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358